حوالي ثلاثة بليون قاعدة . كيف بحث واحد ويعمل بجين واحد فقط بضعة ألف قاعدة لمدة طويلة ؟ ابتكرت لحسن الحظ طبيعة بعض الإنزيمات ( بروتين الذي ينفّذ التفاعلات الكيمياوية ) الذي يحلّ جزء المشكلة . هذه الإنزيمات الخاصّة ، تدعا ال ( تقييد
endonucleases
) ، ولها القدرة لمسح الخيط الطويل لدي إن أي ولاعتراف بسلاسل قصيرة معيّنة كالمعالم في أيّة قطعة من الجزئية على حده . حوالي 40 أو 50 من هذه الإنزيمات معروفة ، كلّ منها يعرف معالم مختلفة ؛ يفرّق كلّ إنزيم التقييد أيّ ( دي إن أي -
DNA
- )
reproducibly
معطى لذا في مجموعة مميزة من القطع القصيرة ، من بضعة مئات إلى بضعة ألف قاعدة لمدّة طويلة .
يمكن استنساخ مثل هذا ( دي إن أي -
DNA
- ) في تجمّع للبكتيريا ، والخطوة الأولى تكون بتنقية دائرة ( دي إن أي -
DNA
- ) بلازمي . بحيث أن سلاسل
plasmids
أحد إنزيمات التقييد سيعرف موقع فريد على البلازمي وفتح الدائرة هناك .
ويمكن إدخال جزء ( دي إن أي -
DNA
- ) مختار في الافتتاح باستعمال تشكيلة أساليب
enzymatic
الذي يوصل نهاياته إلى تلك الدائرة . بشكل عادي جزئية الذي إن أي المركّب هذه لا تستطيع أن تمرّ من خلال جدار الخلايا الجرثومي . يجعل محلول مخفّف من كلوريد الكالسيوم البكتيريا نافذة في خليط الخلايا المعالجة مع ( دي إن أي -
DNA
- ) ، عندئذ بضعة بكتيريا ستبدأ بتكوين البلازمية الهجينة . ثمّ أيّ بكتيريا التي تحمل البلازميين ستكون مقاومة إلى المضاد الحيوي ، بينما كلّ الآخرون سيقتلون بواسطته . إذا تم تقسيم خليط البكتيريا على صحن مادّة مثخّنة يحتوي المواد المغذّية والمضاد الحيوي ، كلّ البكتيريا مفردة البلازمية ستنمو في مستعمرة منفصلة تكون حوالي 100 مليون خلية . ومستعمرة واحدة يمكن أن تختار وتزرع إلحاقا ببلايين محصول الخلايا ، كلّ منها يحتوي نسخ مطابقة لدي إن أي الجديد يرتّب في
recombinant
بلازمي .
تسلسل دي إن أي :
يمكن تفريق ( دي إن أي -
DNA
- ) لخلية حيوانية في ملايين القطع وتدخل كلّ القطعة في بكتيريا مختلفة . بهذه الطريقة يمكن جعل عدد من مجموعات ( دي إن أي -
DNA
- ) كلّ أو أجزاء لإنسان أو فأر أو جرذ أو ذبابة . كما ويمكن تقرير تركيب أي